恶性胶质瘤干细胞分泌的 澳门威斯尼人手机游戏诱导人单核细胞分化为M2巨噬细胞以及调控PD-澳门威斯尼人
栏目:最新研究动态 发布时间:2018-05-28
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恶性胶质瘤干细胞分泌的 澳门威斯尼人手机游戏诱导人单核细胞分化为M2巨噬细胞以及调控PD-澳门威斯尼人

澳门威斯尼人手机游戏由含有嵌入蛋白和RNA的胆质层构成,其三维结构稳定。它可以保护生物活性,增强生物分布,并支持与局部或远处组织中的靶细胞的相互作用。
      澳门威斯尼人手机游戏可以介导恶性肿瘤之间动态交流,即使存在血脑屏障的中枢神经系统和免疫系统中的游离型 澳门威斯尼人手机游戏也有这种作用。
     近日,来自美国德州大学MD安德森癌症中心的Heimberger团队在《Oncoimmunology》(IF=7.719)发表的《
Glioblastoma stem cell-derived exosomes induce M2 macrophages and PD-L1 expression on human monocytes》一文中探讨了胶质母细胞瘤(GBM)来源干细胞(GSCs)分泌的 澳门威斯尼人手机游戏(GDEs)是否可诱导免疫抑制。研究结果发现GDEs倾向于被巨噬细胞前体——单核细胞摄取。GDEs进入单核细胞的细胞质,导致肌动蛋白细胞骨架的重组,并使单核细胞朝向免疫抑制性M2表型(包括程序性死亡配体1(PD-L1)表达)极化。质谱分析表明,GDEs含有多种组分,包括信号转导和转录激活因子3(STAT3)途径的成员,其功能介导该免疫抑制转换。 Western blot分析显示GSC 澳门威斯尼人手机游戏处理的单核细胞和GBM患者浸润的CD14 +细胞中的PD-L1的上调主要与STAT3的磷酸化增加相关,并且在一些情况下与p70S6激酶和Erk1 / 2的磷酸化相关。这些数据表明GDEs分泌的GBM释放因子,是GBM相关免疫抑制性微环境的强效调节剂。


 

技术路线

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实验结果

1.免疫细胞群体对 澳门威斯尼人手机游戏的摄取是可变的

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图1. 澳门威斯尼人手机游戏的特征鉴定。(A)成纤维细胞MRC5、胶质瘤细胞U87、胶质瘤干细胞GSC20和GSC267细胞 澳门威斯尼人手机游戏的代表性直方图。(B)GSC20 澳门威斯尼人手机游戏的透射电子显微镜图像。(C)和(D)流式细胞术分析结合到免疫磁珠的GSC20和MRC5 澳门威斯尼人手机游戏。

 

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图2.免疫群体对 澳门威斯尼人手机游戏的摄取是可变的。(A)GBM患者PBMCs与PKH67标记的GSC 澳门威斯尼人手机游戏(GSC-Exo)共培养,用流式细胞仪检测各种免疫细胞群对GSC-Exo的摄取情况;(B)GBM患者(左)和健康献血者(右)的免疫细胞群体摄取PKH-67标记的GSC20-Exo的数据。(C)用抗CD3/CD28抗体激活T细胞,用PMA和离子霉素激活NK细胞,然后将细胞与PHK67标记的GSC20 澳门威斯尼人手机游戏孵育6小时。流式细胞仪检测被CD4+或CD8+T细胞及CD56+NK细胞摄取的 澳门威斯尼人手机游戏。

 

2.GSC-Exo定位于单核细胞的细胞质中,并诱导单核细胞其肌动蛋白重组

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图3.人单核细胞 澳门威斯尼人手机游戏内化过程。(A)单核细胞摄取 澳门威斯尼人手机游戏的动力学研究。(B)(C)PKH67标记的 澳门威斯尼人手机游戏被单核细胞摄取的共聚焦显微镜图像。(D)用共聚焦显微镜观察单核细胞与PKH67标记的 澳门威斯尼人手机游戏共培养48小时后Phalloidin标记的细胞结构情况。白色箭头指示肌动蛋白重组(E) 澳门威斯尼人手机游戏孵育的单核细胞的胞质区。

3.GSC-Exo诱导单核细胞极化为M2巨噬细胞表型

 

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图4.GSC-Exo将单核细胞极化为M2样表型。(A)用不同来源 澳门威斯尼人手机游戏孵育的单核细胞中M1和M2标记蛋白的表达情况(左)及PD-L1(右)的平均荧光强度[MFI ]。(B)GBM患者组织中的单核细胞标志物IbA1(绿色)和PD-L1抗体(红色)染色图像。(C) 澳门威斯尼人手机游戏孵育单核细胞后MCP-3和CXCL1的相对像素密度。

4.GSC-Exo含有EIF2、mTOR和EphrinB信号通路蛋白

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图5 GSC-Exo和成纤维细胞 澳门威斯尼人手机游戏的蛋白质组学分析。(A)GSC来源(GSC20、GSC17、GSE267)的 澳门威斯尼人手机游戏与成纤维细胞(MRC5,WI38) 澳门威斯尼人手机游戏差异蛋白的通路注释。(B)成纤维细胞(MRC5,WI38) 澳门威斯尼人手机游戏和GSC 澳门威斯尼人手机游戏差异蛋白火山图。

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图6 GSC 澳门威斯尼人手机游戏和成纤维细胞 澳门威斯尼人手机游戏蛋白的亚细胞定位和功能分析。(A)成纤维细胞源性 澳门威斯尼人手机游戏的蛋白质和GSC 澳门威斯尼人手机游戏蛋白质的亚细胞定位;(B)成纤维细胞源性 澳门威斯尼人手机游戏的蛋白质和GSC 澳门威斯尼人手机游戏蛋白质的功能。

5. GSC 澳门威斯尼人手机游戏诱导人单核细胞PD-L1上调,与STAT3磷酸化有关

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图7 澳门威斯尼人手机游戏孵育的人单核细胞PD-L1通路分析及GBM患者血液和肿瘤组织分离的CD14+细胞的PD-L1通路分析(A)p- STAT3、P- STAT1、P- Akt、β-actin、HSP70在成纤维细胞、GSCs、成纤维细胞和GSC衍生的 澳门威斯尼人手机游戏表达分析。(B)用成纤维细胞和GSC衍生的 澳门威斯尼人手机游戏处理两个供体的单核细胞中PD-L1、P- STAT3、STAT3、GAPDH的表达分析。(C)经 澳门威斯尼人手机游戏孵育的人单核细胞中PD-L1和P- STAT3蛋白表达的密度分析。(D)PD-L1、p- STAT3、p- STAT1、p-ERK1/2、pJNK、pp70S6K和GADPH在健康对照外周血CD14+细胞、GBM患者的CD14+细胞和GBM浸润的CD14+细胞的Western分析。


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