miR-134以PDCD7为靶标减少E-钙黏蛋白的 澳门威斯尼人手机游戏从而加速口腔癌的进程
栏目:最新研究动态 发布时间:2018-07-16
miR-134在恶性肿瘤转化中的功能作用是复杂且有争议的。7月4日,中国台湾国立阳明大学的学者在 International Journal of Cancer......

miR-134在恶性肿瘤转化中的功能作用是复杂且有争议的。74日,中国台湾国立阳明大学的学者在 International Journal of CancerIF= 7.360)杂志发表了题为miR-134 targets PDCD7 to reduce E-cadherin expression and enhance oral cancer progression”的论文,该论文阐明了miR-134在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的致癌作用。使用野生型和突变体构建体的报告分析证实,程序性细胞死亡7PDCD7)基因是miR-134的潜在靶标。外源 澳门威斯尼人手机游戏miR-134降低OSCC细胞中PDCD7 澳门威斯尼人手机游戏,外源性 澳门威斯尼人手机游戏miRZip-134增加OSCC细胞中PDCD7的 澳门威斯尼人手机游戏;另外,PDCD7 澳门威斯尼人手机游戏抑制了OSCC细胞的致癌性。通过基因编辑技术敲除PDCD7增加了裸鼠体外致癌性和颈部淋巴结转移,并降低了E-钙粘蛋白(E-cad)的 澳门威斯尼人手机游戏。PDCD7通过启动子中的GC盒反式激活E-cad 澳门威斯尼人手机游戏。此外,PDCD7减弱了miR-134相关的细胞转化和E-cad下调。在OSCC肿瘤组织中观察到PDCD7E-cad的下调和高水平的miR-134 澳门威斯尼人手机游戏。miR-134-PDCD7-E-cad 发病机制级联的激活发生在人和小鼠口腔癌变的早期阶段。总之,miR-134在口腔癌中的致癌作用是通过降低PDCD7E-cad的 澳门威斯尼人手机游戏来介导的。

技术路线:

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研究结果:

1. miR-134OSCC细胞中以PDCD7为靶点

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1. miR-134OSCC细胞中靶向PDCD7a)外源miR-134OSCC细胞亚克隆中 澳门威斯尼人手机游戏。(bc)外源miR-134稳定 澳门威斯尼人手机游戏增加了OSCC细胞的生长和迁移。(de)外源miR-134瞬时 澳门威斯尼人手机游戏增加了BrdU标记的细胞群和OSCC细胞的侵袭。(fg)外源miRZip-134 澳门威斯尼人手机游戏抑制OECM1细胞的增殖和迁移。(himiR-134PDCD73'UTR的作用导致WtR细胞中PDCD7活性降低; 然而,PDCD7活性在MutR的细胞中恢复。(j)外源miR-134 澳门威斯尼人手机游戏降低OSCC细胞中的PDCD7 澳门威斯尼人手机游戏,而miRZip-134 澳门威斯尼人手机游戏增加OECM1细胞中的PDCD7 澳门威斯尼人手机游戏。(kOSCC细胞系中miR-134PDCD7E-cad 澳门威斯尼人手机游戏的分析。(lHeatmap blotOSCC细胞系中miR-134PDCD7E-cad 澳门威斯尼人手机游戏之间的相关性。

2. PDCD7抑制OSCC细胞的增殖和迁移,miR-134- PDCD7调控E-cad 澳门威斯尼人手机游戏

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2. miR-134下调OSCC细胞中PDCD7E-cad的 澳门威斯尼人手机游戏。a)外源 澳门威斯尼人手机游戏PDCD7抑制OECM1细胞的生长(上图),BrdU标记的细胞群(中图)和迁移(下图)。(bc)左图,细胞生长测定;右图,迁移试验。(d-gWB分析。(h)免疫荧光。(bhOECM1细胞;cFaDu细胞;deOECM1FaDu细胞;fgOECM1SAS细胞。(b)外源性PDCD7在对照和 澳门威斯尼人手机游戏miR-134OECM1细胞中的 澳门威斯尼人手机游戏。(c)外源性PDCD7在对照和 澳门威斯尼人手机游戏miR-134FaDu细胞中的 澳门威斯尼人手机游戏。(d)外源miR-134 澳门威斯尼人手机游戏降低OSCC细胞中的PDCD7E-cad 澳门威斯尼人手机游戏。(emiR-134抑制剂处理时增加OSCC细胞中的PDCD7E-cad 澳门威斯尼人手机游戏。miR-134调节的β-连环蛋白和波形蛋白的变化不一致。(f)外源性PDCD7 澳门威斯尼人手机游戏增加OSCC细胞中的E-cad 澳门威斯尼人手机游戏。(g)外源性PDCD7 澳门威斯尼人手机游戏可恢复mi-134介导的对E-cad的抑制。(hOECM1细胞主要在细胞核中观察到内源性和外源性PDCD7免疫荧光。

3.敲除PDCD7增加OSCC细胞的迁移并减少E-cad 澳门威斯尼人手机游戏

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3. 敲除PDCD7增加了OSCC细胞致癌表型并降低E-cad 澳门威斯尼人手机游戏。OECM1细胞和SAS细胞及其敲除PDCD7细胞亚克隆进行分析。(acOECM1细胞;bdeSAS细胞;f - hOECM1SAS细胞。(ab)上图,细胞生长测定;下图,典型的倒置显微镜图像。(cd)上图,迁移试验;下图,在transwell膜下表面使用DAPI标记的细胞核的代表性图像。DAPI4'6-二脒基-2-苯基吲哚,二盐酸盐。(e)侵袭试验。对SAS细胞及其敲除PDCD7的细胞亚克隆进行分析。(fqRT-PCR分析以检测E-cadmRNA 澳门威斯尼人手机游戏。(gh)蛋白质印迹分析。敲除PDCD7E-cad和活性β-连环蛋白 澳门威斯尼人手机游戏降低;外源 澳门威斯尼人手机游戏PDCD7E-cad 澳门威斯尼人手机游戏增加。除了SPDCD7 CR 2-4之外,所有细胞亚克隆中均观察到外源 澳门威斯尼人手机游戏PDCD7β-连环蛋白的 澳门威斯尼人手机游戏增加。

4. PDCD7通过调控GC-Box增加E-cad启动子活性

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4.E-cad启动子报告基因测定和ChIP测定。a-d)野生型E-cad启动子报告基因测定。(eE-cad启动子中缺失报告基因构建体的示意图。(f)检测缺失构建体。(abd - hOECM1细胞。(cFaDu细胞。(af)外源性 澳门威斯尼人手机游戏PDCD7。(b) 澳门威斯尼人手机游戏miR-134。(c)抑制miR-134。(d)敲除PDCD7。(ghChIP测定。(gPCR产物的凝胶电泳图像。(hChIP qPCR分析。

5. miR-134-PDCD7-E-cad在小鼠口腔癌中的激活

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5. miR-134-PDCD7-E-cad致癌轴在小鼠化学致癌模型和原位颈部转移模型中的调节。a - df4NQO诱导的小鼠舌肿瘤发生模型。(g -iNOD-SCID小鼠的原位颈部转移模型。(a)与未处理的对照组织相比,癌前病变(16周)和肿瘤病变(28周)中的miR-134染色和PDCD7E-cad免疫反应性。对照组织,×100;病变组织,×200。(b-dmiR-134PDCD7E-cad定量分析。(e)在各种OSCC细胞系中,用4NQO处理均增加miR-134 澳门威斯尼人手机游戏。(FHeatmap blot表明小鼠口腔组织中miR-134PDCD7E-cad之间 澳门威斯尼人手机游戏的相关性。(g)来自SAS细胞或SPDCD7 CR2-2细胞亚克隆的舌癌和颈部淋巴结病变原发肿瘤的典型病理组织学切片。虚线环绕颈部转移病灶。(hi)肿瘤体积的定量(左图)和转移率(右图)。(h)所有肿瘤。(i)肿瘤大小< 10 mm3

6. miR-134-PDCD7-E-cad在人类OSCC中的激活

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6. miR-134-PDCD7-E-cad在人类OPMDOSCC组织中的状态。abOPMD c - gOSCC。(acmiR-134染色和PDCD7E-cadOPMDOSCC组织阵列中的免疫反应性。上图,病变表现出强miR-134染色和相对较低的PDCD7ECAD免疫反应;下图,病变表现出弱miR-134染色和相对较高的PDCD7E-cad免疫反应。OPMD× 200; OSCC× 100。(b)左图,miR-134PDCD7E-cad定量分析。中图,heatmap blot表明OPMDmiR-134PDCD7E-cad 澳门威斯尼人手机游戏之间的相关性。右图,PDCD7E-cad 澳门威斯尼人手机游戏的相关性分析。(dOSCC组织阵列中miR-134PDCD7E-cad评分前后图。(e)左图和(fheatmap blot分别说明OSCC组织阵列中miR134/PDCD7/E-cad 澳门威斯尼人手机游戏之间的相关性,以及miR134/PDCD7/E-CAD/WWOX在组织对中的 澳门威斯尼人手机游戏。(e)右图,组织阵列中PDCD7E-cad 澳门威斯尼人手机游戏之间的相关性分析。(g)总生存期(左图)和无病生存期(右图)。比较具有高miR-134 澳门威斯尼人手机游戏水平和低PDCD7E-cad 澳门威斯尼人手机游戏水平的OSCC肿瘤,以及具有相反 澳门威斯尼人手机游戏谱的肿瘤。OS,整生存期;DFS,无病生存期。


结论:

该研究阐明了在口腔癌中miR-134靶向PDCD7以驱动致癌性,并且PDCD7反式激活E-钙粘蛋白 澳门威斯尼人手机游戏。在小鼠模型中,PDCD7的敲除增加了口腔癌异种移植物的淋巴结转移。 miR-134-PDCD7-E-cad调节轴的激活发生在口腔癌发生的早期阶段。 这项工作显示miR-134抑制和PDCD7诱导对口腔癌消除的潜力。


参考文献Shih-Yuan Peng , Hsi-Feng Tu, Cheng-Chieh Yang, Cheng-Hsien Wu,Chung-Ji Liu,Kuo-Wei Chang , Shu-Chun Lin. miR-134 targets PDCD7 to reduce E-cadherin expression and enhance oral cancer progression. International Journal of Cancer. 2018 Jul


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