高分文章揭示miRNA最新调控机制
栏目:最新研究动态 发布时间:2018-08-17
随着非编码RNA研究成果的不断涌现,要发高分文章就需要寻找新的模型、研究最新的机制......

随着非编码RNA研究成果的不断涌现,要发高分文章就需要寻找新的模型、研究最新的机制。目前 lncRNA染色质调控和ceRNA机制的研究比较成熟,然而其作为miRNA cluster前体在肿瘤及澳门威斯尼人官网上的作用研究还比较少。近日(10月16),范德堡大学的研究者在Nature Medicine(IF=29.8)上以“lncRNA MIR100HG-derived miR-100 and miR-125b mediate cetuximab resistance via Wnt/β-catenin signaling”为题,报道了lncRNA作为miRNA cluster前体,诱导癌症耐西妥昔单抗(cetuximab)的新机制。

亮点

1、首次发现lncRNA MIR100HG 及其衍生的miR-100, miR-125b在药物澳门威斯尼人官网中的作用。

2、miR-100 和miR-125b cluster的协同澳门威斯尼人官网作用。

3、GATA6和MIR100HG/ miR-125b的负调控回路。

研究思路

1、3D细胞培养构建澳门威斯尼人官网细胞模型:作者使用3D细胞培养系统将cetuximab敏感的结直肠癌细胞连续4个月暴露在cetuximab中,获得澳门威斯尼人官网细胞。

2、筛查澳门威斯尼人官网相关基因:作者对澳门威斯尼人官网和非澳门威斯尼人官网CRC细胞进行全外显子测序、全转录组测序和small RNA 测序,最后发现lnc MIR100HG、mir - 100和mir - 125b在澳门威斯尼人官网细胞中上调。作者发现lnc MIR100HG是mir - 100和mir - 125b的宿主机因, 随后利用qPCR、 FISH、TCGA数据库和不同澳门威斯尼人官网程度细胞检测表达,验证这几基因在澳门威斯尼人官网中上调。

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3、miR-100 和 miR-125b 协同澳门威斯尼人官网功能研究: 通过慢病毒过表达miR-100、miR-125b及它们双顺反子,通过对应的spongs 消减;然后检测克隆数、利用免疫荧光检测生长和凋亡marker、动物实验验证肿瘤大小和重量。结果发现双顺反子促澳门威斯尼人官网细胞生存能力最强,证明两个miRNA的协同澳门威斯尼人官网作用。

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4、miR-100 和miR-125b 澳门威斯尼人官网机制研究:预测miRNA的靶基因,通过荧光素酶报告基因实验等证明wnt的几个抑制剂可作为miR-100 或miR-125b的靶基因,同时通过免疫荧光、qPCR和动物实验验证miR-100 或miR-125b通过wnt 通路调控澳门威斯尼人官网。

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5、调控miR-100 和miR-125b的机制:为研究miR-100 和miR-125b上调的原因,首先寻找宿主基因lnc MIR100HG启动子上的转录因子。通过wb、免疫荧光和免疫组化证明转录因子GATA6在澳门威斯尼人官网细胞中下调;通过荧光素酶报告基因实验、敲除等实验证明GATA6抑制lnc MIR100HG启动活性。同时,作者发现 GATA6 具miR-125b结合位点,通过荧光素酶报告基因实验及过表达/敲除实验证明它们的负调控。从而证明GATA6和MIR100HG/ miR-125b的负调控回路。

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6、临床样本验证cetuximab治疗结直肠癌澳门威斯尼人官网后MIR100HG、miR-100和miR-125b上调。


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