乙醇通过FoxO1调控肝细胞miR-澳门威斯尼人
栏目:最新研究动态 发布时间:2018-09-07
酒精性肝病(ALD)是慢性肝病死亡的主要原因之一。但其发病机制尚未完全确定.....

酒精性肝病(ALD)是慢性肝病死亡的主要原因之一。但其发病机制尚未完全确定。2018年2月Heo MJ 在Gut(IF=17.01)上发表论文探讨了ALD对肝细胞中miRNA的失调,以及肝损伤的影响。本研究通过澳门威斯尼人官网酒精肝炎(AH)患者、动物肝脏组织以及肝细胞中miR-148a的水平,证实了乙醇可通过激活miR-148a依赖性TXNIP过表达介导的NLPR3炎性小体的活化诱导肝细胞焦亡,为减少ALD的发生率和进展提供了新的靶点信息。

技术路线:

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结果:

1.miR-148a在AH和ALD动物模型中失调

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Fig1

A.miRNA下调的聚类图;B.PCR澳门威斯尼人官网 AH患者 miR-148a;C. PCR澳门威斯尼人官网小鼠肝脏miR-148a;D病理学澳门威斯尼人官网、以及血清中ALT和TG的含量变化;PCR澳门威斯尼人官网小鼠原代肝细胞和AML-12细胞中miR-148a的变化。

2.FoxO1为miR-148a的转录因子

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Fig2

A.筛选目的基因;B,PCR澳门威斯尼人官网AH患者肝脏中FoxO1的表达量;C PCR澳门威斯尼人官网过量饮酒小鼠肝脏中FoxO1的表达量;D.WB澳门威斯尼人官网FoxO1,FoxO3a蛋白表达。

 

3. FoxO1诱导miR-148a的转录

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Fig3

A. 在人体肝脏样本中FoxO1与miR-148a的相关性;B.在小鼠肝脏样本中FoxO1与miR-148a的相关性;C.转染Mock或FoxO1的AML-12细胞中miR-148a表达增多;D.Chip验证FoxO1与miR-148a启动子区相结合;E. 荧光素酶报告基因澳门威斯尼人官网。

 

4.由乙醇引起miR-148a的失调可以导致TXNIP的过表达

 

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Fig4

A. 确定miR-148a的靶基因;B.PCR澳门威斯尼人官网AH患者TXNIP含量;C.PCR,WB澳门威斯尼人官网小鼠肝脏中TXNIP的基因和蛋白表达含量;D澳门威斯尼人官网乙醇处理原代肝细胞中TXNIP的表达;E.转染miR-480a mimic和miR-480a ASO后,澳门威斯尼人官网TXNIP的表达;F.双荧光素酶报告基因实验;G.miR-480a转染乙醇处理的小鼠肝细胞,澳门威斯尼人官网TXNIP的基因和蛋白表达。

5.乙醇激活肝细胞NLRP3炎性小体

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Fig5

A.NLRP3、Pycard、II1b聚类图;B.乙醇处理后可增加原代肝细胞和AML-12细胞中NLRP3、Caspase-1、ASC的表达;D. TXNIP,NLRP3免疫荧光染色;E.免疫共沉淀和WB澳门威斯尼人官网Caspase-1、ASC、TXNIP蛋白表达;F. 转染miR-480a激光共聚焦澳门威斯尼人官网TXNIP,NLRP3;G.流式澳门威斯尼人官网Caspase-1/PI双阳性数量。

6.氯磷酸盐处理小鼠肝细胞导致炎性因子激活

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Fig6

A、B组织病理学染色;C.WB澳门威斯尼人官网相关蛋白;D.血清ALT和AST的活性;E.免疫组化染色澳门威斯尼人官网TXNIP和caspase-1。

7.肝细胞特异性传递miR-480a改善肝损伤

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Fig7

A.组织病理学染色;B.WB澳门威斯尼人官网相关蛋白;C. 免疫组化染色澳门威斯尼人官网TXNIP和caspase-1;D.肝比重和血液生化指标;E.乙醇诱导细胞焦亡的机制

 

 

 


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