lncRNA与核糖体澳门威斯尼人官网相互作用促肿瘤
栏目:最新研究动态 发布时间:2020-01-15
癌症是导致儿童死亡的最常见疾病,神经母细胞瘤占比较大。关爱儿童健康中重要的一环就是对于致癌基因的研究......

   癌症是导致儿童死亡的最常见疾病,神经母细胞瘤占比较大。关爱儿童健康中重要的一环就是对于致癌基因的研究。已发现lncRNA与癌症联系紧密,那么lncRNA和神经母细胞瘤会产生哪些联系呢?今天,小编带大家一探其奥秘吧。


文章思路:


结果:
1. LncNB1在MYCN扩增的神经母细胞瘤中过表达

   MYCN扩增的神经母细胞瘤细胞系显示出高N-Myc,MYCNOS和IGF2BP1表达水平以及低c-Myc RNA表达水平。染色体上的lncRNA RP1-40E16.9,也称为LOC100507194和LINC02525,本文中称为lncNB1,同样高表达并显示与N-Myc、 MYCNOS非常相似的表达模式,表明该lncRNA可能是参与MYCN扩增的神经母细胞瘤的肿瘤发生。检查lncNB1在人肿瘤组织中的表达,lncNB1在人类神经母细胞瘤中升高,在MYCN扩增的胶质瘤细胞系中高表达,lncNB1 RNA表达与N-Myc mRNA表达正相关。


2. LncNB1上调DEPDC1B基因和E2F1澳门威斯尼人官网表达
   DEPDC1B可以诱导ERK澳门威斯尼人官网的磷酸化,磷酸化的ERK是可以增强N-Myc澳门威斯尼人官网的稳定性。lncNB1 siRNA持续降低DEPDC1B mRNA和澳门威斯尼人官网质以及E2F1澳门威斯尼人官网质,但未显示对E2F1 mRNA的一致作用。强力霉素治疗减少lncNB1、DEPDC1B mRNA、DEPDC1B和E2F1澳门威斯尼人官网、不减少E2F1 mRNA表达。


3. LncNB1通过DEPDC1B上调N-Myc澳门威斯尼人官网表达
   lncNB1 siRNA转染胶质瘤细胞不会改变N-Myc mRNA的表达, 但降低DEPDC1B澳门威斯尼人官网的表达、ERK澳门威斯尼人官网的磷酸化、N-Myc澳门威斯尼人官网的S62磷酸化和表达。DEPDC1B siRNA的转染效果一致。lncNB1 siRNA或DEPDC1B siRNA可使N-Myc澳门威斯尼人官网半衰期减少约50%,加入澳门威斯尼人官网酶抑制剂MG-132并没有增加DEPDC1B澳门威斯尼人官网的表达,上调N-Myc澳门威斯尼人官网表达。敲低lncNB1减少了DEPDC1B和N-Myc澳门威斯尼人官网表达,ERK澳门威斯尼人官网磷酸化和NMyc澳门威斯尼人官网在S62处磷酸化。


4.LncNB1通过E2F1激活DEPDC1B基因转录
   克隆DEPDC1B基因转录起始位点上游1146、545或75 bp区域到 pGL3 萤火虫荧光素酶载体,并转染该载体进入强力霉素诱导的对照shRNA、lncNB1 shRNA-1或lncNB1 shRNA-2 BE(2)-C细胞。用强力霉素敲低lncNB1降低所有野生型的荧光素酶活性,表明DEPDC1B转录起始位点上游75 bp区域对于lncNB1激活DEPDC1B基因转录至关重要。敲除75 bp区域的富含E2F1-结合位点的20 bp核苷酸废除lncNB1 shRNAs的降低DEPDC1B启动子活性作用。E2F1敲低可降低DEPDC1B mRNA和澳门威斯尼人官网质表达。降低lncNB1表达减少了DEPDC1B基因核心的E2F1澳门威斯尼人官网结合。过表达E2F1及其功能伴侣DP1增强野生型DEPDC1B基因启动子活性,DEPDC1B基因启动子的E2F1结合位点富集的20个核苷酸被删除后,这种效应也被废除。

 

5.LncNB1通过结合RPL35来诱导E2F1澳门威斯尼人官网翻译
   降低RPL35会下调DEPDC1B、N-Myc和E2F1澳门威斯尼人官网表达,降低ERK澳门威斯尼人官网磷酸化,降低N-Myc澳门威斯尼人官网在S62处的磷酸化和表达。抗RPL35抗体有效降低了BE(2)-C和Kelly细胞中的RPL35澳门威斯尼人官网,RPL35澳门威斯尼人官网与lncNB1 RNA和E2F1 RNA结合,lncNB1 siRNA-1或siRNA-2转染可降低RPL35澳门威斯尼人官网质与E2F1 RNA结合。lncNB1 siRNA减少了E2F1澳门威斯尼人官网的合成,而不是全局澳门威斯尼人官网的合成,RPL35 siRNA减少全局澳门威斯尼人官网质,包括E2F1的表达。lncNB1敲低转移了E2F1 mRNA,减少E2F1 mRNA翻译。综合来看,lncNB1通过结合核糖体澳门威斯尼人官网RPL35增加E2F1澳门威斯尼人官网表达,导致E2F1澳门威斯尼人官网质合成和DEPDC1B基因转录。


6.LncNB1诱导神经母细胞瘤细胞增殖和存活
   敲低lncNB1降低了胶质瘤活细胞的数量,减少增殖,诱导凋亡。DEPDC1B siRNA,RPL35 siRNA或E2F1 siRNA转染细胞减少瘤细胞数量。敲低lncNB1减少S期瘤细胞数量,诱导凋亡。


7.LncNB1敲低导致小鼠中神经母细胞瘤消退
   强力霉素诱导对照shRNA,lncNB1 shRNA-1或lncNB1 shRNA-2处理的瘤细胞,发现强力霉素诱导废除lncNB1 shRNA-1或lncNB1 shRNA-2处理的瘤细胞的克隆形成能力。强力霉素诱导的lncNB1 shRNA-1 BE(2)-C细胞异种移植到裸鼠中,当肿瘤达到50mm3时强力霉素处理,发现强力霉素抑制神经母细胞瘤进展,敲降低lncNB1可以大大提高小鼠的整体生存率。


8.肿瘤组织中的高lncNB1预测患者预后不良
   lncNB1 RNA表达与MYCN扩增、N-Myc mRNA、DEPDC1B mRNA表达呈正相关,RPL35和E2F1 mRNA表达与DEPDC1B mRNA表达呈正相关。瘤组织中高表达lncNB1、DEPDC1B、RPL35和E2F1 RNA表达与患者不良预后相关。

 

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