LncRNA与周期蛋白抑制剂耐药性
栏目:最新研究动态 发布时间:2020-07-22
雌激素受体阳性(ER +)澳门威斯尼人官网约占所有澳门威斯尼人官网的三分之二,并有持续晚期疾病复发的风险。细胞周期蛋白依赖性激酶4和6...

    雌激素受体阳性(ER +)澳门威斯尼人官网约占所有澳门威斯尼人官网的三分之二,并有持续晚期疾病复发的风险。细胞周期蛋白依赖性激酶4和6(CDK4 / 6)抑制剂在ER +澳门威斯尼人官网中已显示出显著疗效。但是,它们的作用仍然受到耐药性的限制。今天这篇研究探讨lncRNA在ER +澳门威斯尼人官网中的作用,带我们熟悉了解lncRNA的研究思路。

技术路线:

结 果:
1. ER +澳门威斯尼人官网中LncRNA TROJAN高表达并预测差生存
    澳门威斯尼人官网和正常人组织中TROJAN表达增高,数据库显示TROJAN与不良生存相关,TROJAN是独立的预后因素。GO分析表明TROJAN相关基因中细胞周期相关基因的富集程度更高。TROJAN可能会通过细胞周期调节ER +澳门威斯尼人官网的进展。

2. 抗TroJAN ASO治疗使ER +澳门威斯尼人官网对PD致敏
    使用ASO评估TROJAN在ER +澳门威斯尼人官网中的治疗潜力。ASO转染的T47D细胞表现出降低的TROJAN表达以及降低的增殖能力,ASO和CDK4 / 6抑制剂(palbociclib,ribociclib和abemaciclib)可联合抗癌功效比单独抑制剂高。

3. TROJAN下调通过诱导G1 / S细胞周期停滞抑制ER +澳门威斯尼人官网增殖
    细胞敲低TROJAN增殖潜能受损害, 过表达促进增殖。构建雌性裸鼠乳腺脂肪垫注射模型,以研究TROJAN对体内ER +澳门威斯尼人官网增殖的影响。下调TROJAN显著降低肿瘤体积,转录基因芯片分析TROJAN下调的细胞中与周期有关的生物过程发生显著变化。TROJAN的下调导致G1期细胞增加,Cyclin E1 / 2降低,P21 / P27升高,增殖标记MKI67阳性少,在含PD的培养基中,PDR细胞的生长速度高于MCF7细胞和TROJAN敲低的PDR细胞。这些表明TROJAN通过调节G1 / S细胞周期促进ER +澳门威斯尼人官网进展。

4. ER +澳门威斯尼人官网中TROJAN与NKRF蛋白有关
    进一步探索TROJAN在ER +澳门威斯尼人官网中的潜在的机制, 筛选出NKRF作为ER +澳门威斯尼人官网中重要的TROJAN相互作用蛋白。TROJAN和NKRF在细胞核中共定位,异位表达全长FlagNKRF以及三个突变体:截短的R3H结构域(ΔNKRF-1)突变体,截短的R3H + G-patch域(ΔNKRF-2)突变体和NKRF N端(ΔNKRF-3)突变体。RIP分析表明删除R3H + G域,但不能仅删除R3H域,可取消TROJAN-NKRF相互作用。已知G-patch结构域具有RNA结合功能,因此TROJAN可以结合到NKRF的G-patch域。敲低NKRF 促进MCF7细胞的增殖,TROJAN敲低导致的增殖抑制可被另外的敲低NKRF减弱,这表明TROJAN敲低诱导的表型可能由NKRF部分营救。

5. TROJAN通过NKRF调节CDK2转录
    为研究TROJAN调控的下游靶标,分析TROJAN敲低的MCF7细胞微阵列数据,发现TROJAN敲低下调694个基因, 51个基因与TROJAN呈正相关,包括8个细胞周期有关基因。TROJAN敲低增加CDK2,NKRF敲低降低了蛋白的表达,TROJAN和NKRF的组合恢复了CDK2的表达。TROJAN敲除可抑制CDK2启动子活性,被NKRF敲除激活。在异种移植模型, 在TROJAN敲除肿瘤中CDK2的表达降低。TROJAN敲低后NKRF的CDK2启动子上结合能力显著增加,TROJAN敲低MCF7细胞中过表达CDK2可部分恢复增殖抑制。这些表明TROJAN阻止NKRF在CDK2启动子上的结合,并在转录水平调节CDK2的表达。

6. TROJAN与CDK2和MKI67正相关
    测定CDK2和增殖标记MKI67在ER +澳门威斯尼人官网中的表达,发现TROJAN在mRNA和蛋白质水平上均与CDK2和MKI67正相关。

总 结:
    1. TROJAN-NKRF-CDK2的癌症调控模式
    2. 抗TROJAN ASO与CDK4 / 6抑制剂联合使用是有前途的联合抗癌疗法。




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