巨噬细胞外泌体在澳门威斯尼人官网中研究进展
栏目:最新研究动态 发布时间:2020-09-07
澳门威斯尼人官网(HCC)是癌症死亡的第二大原因,严重威胁人类健康。肿瘤的发生、进展和转移受肿瘤微环境的影响...

        澳门威斯尼人官网(HCC)是癌症死亡的第二大原因,严重威胁人类健康。肿瘤的发生、进展和转移受肿瘤微环境的影响。巨噬细胞是最常见的免疫细胞,是肿瘤微环境中的重要组成部分。巨噬细胞外泌体在HCC中的研究新进展来了。

研究思路:

结果:
1. 与巨噬细胞共培养后澳门威斯尼人官网细胞的侵袭能力增加
        研究浸润性巨噬细胞对澳门威斯尼人官网的潜在影响。PMA诱导THP-1细胞中的巨噬细胞,共培养THP-1巨噬细胞与澳门威斯尼人官网细胞,M2巨噬细胞标记(CD206,CD163,TGFβ,Arginase-1)增加,澳门威斯尼人官网细胞的侵袭能力增加。MTT分析表明巨噬细胞共培养使澳门威斯尼人官网细胞的增殖能力下降,因此侵袭能力的增加不是由于增殖能力的增加所致。以上表明,浸润的巨噬细胞可增加澳门威斯尼人官网细胞侵袭能力。

2. 浸润性巨噬细胞通过改变AR表达增加澳门威斯尼人官网细胞侵袭
        最近研究表明AR可能在改变澳门威斯尼人官网进展中起关键作用。分析AR的临床意义,AR 在原发性肿瘤中表达较低,随着肿瘤分期的增加,AR表达减少。共培养后肿瘤细胞中AR表达降低。添加AR-cDNA减少浸润巨噬细胞诱导的澳门威斯尼人官网细胞侵袭,而添加AR-shRNA导致澳门威斯尼人官网细胞侵袭增加。以上提示:浸润的巨噬细胞可能通过抑制澳门威斯尼人官网细胞AR表达来增加澳门威斯尼人官网细胞侵袭。

3. 浸润性巨噬细胞通过改变miRNA降低澳门威斯尼人官网细胞中AR表达
        共培养导致澳门威斯尼人官网细胞中的AR表达减少。检测
Cycloheximide处理的澳门威斯尼人官网细胞中AR蛋白水平,发现在对照组(非共培养)和共培养组之间没差异。表明巨噬细胞可能通过转录或转录后调控调节澳门威斯尼人官网细胞AR mRNA水平。共培养后澳门威斯尼人官网细胞中miR-92a-2-5p,miR-3153,miR-589-5p的表达增加,miR-92a-2-5p和miR-3153可逆转共培养对AR的影响以及共培养后澳门威斯尼人官网细胞的侵袭能力。这些表明,巨噬细胞可能通过增加miR-92a-2-5p和miR-3153表达降低澳门威斯尼人官网细胞AR表达。

4. 巨噬细胞通过外泌体增加miRNA表达
        miRNA可以被外泌体从巨噬细胞转运到邻近肿瘤细胞。巨噬细胞中高表达miR-92a-2-5p和miR-3153,抑制巨噬细胞中两个miRNA,与澳门威斯尼人官网细胞共培养,发现可逆转共培养对澳门威斯尼人官网细胞的影响。收集M2-型巨噬细胞培养基,加入澳门威斯尼人官网细胞中,发现巨噬细胞外泌体导致澳门威斯尼人官网细胞中AR表达减少,加入外泌体分泌抑制剂(GW4869),巨噬细胞失去影响癌细胞的能力。转染pLKO-miR-92a-2-5p抑制剂后或pLKO-miR-3153抑制剂,发现巨噬细胞外泌体中miR-92a-2表达降低,表明外泌体可将miR-92a-2-5p从巨噬细胞转运到澳门威斯尼人官网细胞。pLKO-miR-92a-2-5p抑制剂逆转巨噬细胞的诱导肝细胞侵袭能力,过表达miR-92a-2-5p后AR表达降低且癌细胞的侵袭能力增加。总之,巨噬细胞通过转运miR-92a-来减少澳门威斯尼人官网细胞的AR表达,从而增加肿瘤侵袭能力。

5. miR-92a-2-5p直接靶向AR mRNA的3'UTR改变AR表达
        搜索AR mRNA 3'UTR上的miR-92a-2-5p潜在靶向位点,萤光素酶报告检测以及敲除miR-92a-2-5p验证miR-92a-2-5p直接靶向AR mRNA的3'UTR以抑制其蛋白表达。

6. 巨噬细胞/外泌体/ miR-92a-2-5p / AR轴通过改变PHLPP /p-AKT /β-catenin信号调控澳门威斯尼人官网细胞浸润能力
        检测共培养中癌症相关蛋白质的表达,发现β-catenin与AR的变化最一致。原发性肿瘤中β-catenin表达增加,AR可通过转录调控PHLPP, PHLPP可通过去磷酸化灭活AKT,提高前列腺癌的侵袭能力,而p-AKT /β-catenin信号与肿瘤进展有关。共培养后癌细胞中p-AKT表达增加,PHLPP水平降低。改变巨噬细胞中miR-92a-5p表达导致相似的变化,加入AKT或β-catenin抑制剂,巨噬细胞的作用被阻断。以上表明,巨噬细胞/外泌体/ miR-92a-2-5p / AR轴可通过改变PHLPP / p-AKT /β-catenin信号来调节澳门威斯尼人官网细胞的侵袭。

7. 临床前研究:利用miR-92a-2-5p抑制剂靶向此信号通路抑制澳门威斯尼人官网进展
        构建带有荧光素酶报道基因的癌细胞,pLKO-miR-92a-2-5p抑制剂转染THP-1细胞,共培养细胞后进行异种移植。发现巨噬细胞处理肝细胞组明显快于对照组,添加pLKO-miR-92a-2-5p抑制剂可部分抑制肿瘤生长,SK-HEP-1-Luc和THP-1-pLKO共培养组转移小鼠比其他两组更多,AR表达降低。分析miR-92a-2-5p在TCGA数据库中的HCC临床样品的表达,发现miR-92a在肿瘤中表达增加。HCC患者低miR-92a-2-5p表达的生存时间比高miR-92a-2-5p表达患者长。表明巨噬细胞miR-92a-2-5p改变AR促进澳门威斯尼人官网进展。

参考文献:
The miR-92a-2-5p in exosomes from macrophages increases liver cancer cells invasion via altering the AR/PHLPP/p-AKT/β-catenin signaling


 


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